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溶酶體染色試劑盒實驗前的準備工作

更新時間:2018-04-10      點擊次數(shù):1609
  染色工作液配制實驗開始前,將試劑盒內(nèi)各組分從冰箱內(nèi)取出,置于室溫回溫15~20min。其中X-Gal溶液C置入冰槽里等待溶化。根據(jù)以下染色工作液配方表(表1),實驗體系類型,檢測樣本數(shù),統(tǒng)一配制單次實驗需要的染色工作液總量。混勻后,置入37ºC恒溫水槽里預(yù)熱,即為染色工作液。
 
  溶酶體染色試劑盒是細胞控制其生長潛能的保障機制一般含義是復(fù)制衰老(Replicative senescence,RS),指正常細胞經(jīng)過有限次數(shù)的分裂后,停止分裂,此時細胞雖然是存活的,但是細胞形態(tài)和生理代謝活性發(fā)生明顯變化的現(xiàn)象。體外衰老細胞研究常用的生物學(xué)特征包括不可逆的生長停滯;)與衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶senescence associated β-galactosidase, SA β-gal)的活化。作為溶酶體內(nèi)的水解酶,通常在pH 4.0的條件下表現(xiàn)活性。但是衰老細胞內(nèi)其在pH 6.0的條件下表現(xiàn)活性,且隨著傳代次數(shù)的增加,細胞群體中表現(xiàn)衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶的細胞數(shù)目逐漸增加。
 
  溶酶體染色試劑盒注意事項,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作,本試劑盒固定液B存在一定的腐蝕性和毒性,操作時請注意小心防護。染色液E剛剛?cè)芙夂髸^察到有沉淀,屬正?,F(xiàn)象,充分混勻或者漩渦震蕩可促使沉淀全部溶解,之后用于染色實驗。X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的細胞樣品可以在 4ºC冰箱保存,但也需避免光照。細胞β-半乳糖苷酶活性強,孵育3 h即顯示陽性;細胞β-半乳糖苷酶活性弱,則需要孵育24 h。細胞染色zui長孵育時間為 24 h。細胞呈現(xiàn)藍色的部位即為衰老細胞特異性β-半乳糖苷酶活性部位。細胞衰老β-半乳糖苷酶染色反應(yīng)依賴于特定的pH值,不能用于細胞培養(yǎng)的CO2培養(yǎng)箱中進行染色反應(yīng)。因為CO2培養(yǎng)箱中較高濃度的CO2會影響染色工作液的pH值,導(dǎo)致染色失敗。本試劑盒適合各種類型和規(guī)格的培養(yǎng)細胞:載玻片,載玻片培養(yǎng)皿,35 mm 培養(yǎng)皿和各種孔數(shù)的細胞培養(yǎng)板,只需按照一定的比例調(diào)整工作液用量即可。
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