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EZ ECL Femto化學(xué)發(fā)光液(飛克級(jí))

更新時(shí)間:2018-11-13      點(diǎn)擊次數(shù):2682

使用方法

1) 取出印記膜,加入合適的封閉液在溫室下孵育20-60分鐘,同時(shí)振蕩,以封閉膜上非特異性蛋白結(jié)合位點(diǎn)。

2) 將膜從封閉液中取出,與一抗工作液在溫室孵育1小時(shí),同時(shí)振蕩;或在28℃孵育過(guò)夜,不振蕩。

3) 將足量的洗滌緩沖液加至膜上,保證緩沖液將膜*覆蓋。振蕩孵育≥5分鐘,更換洗滌緩沖液并重復(fù)該步驟4-6次。增加洗滌緩沖液體積,洗滌次數(shù)和洗滌時(shí)間有助于降低背景信號(hào)。

注:1)孵育前,膜在洗滌緩沖液中的短暫淋洗會(huì)提高洗滌效率;2)按前文建議的HRP標(biāo)記二抗稀釋度非常重要的。

4) 將HRP標(biāo)記的二抗工作液與膜在溫室孵育1小時(shí),同時(shí)振蕩。

5) 重復(fù)步驟3,以除去未結(jié)合的HRP標(biāo)記二抗。注:膜與HRP標(biāo)記二抗孵育后必須進(jìn)行*洗滌。

6) 將A溶液與B液等比例混合,制備成工作液。每cm2膜使用0.01~0.1ml工作液,工作液可以在溫室下穩(wěn)定8小時(shí)。

7) 將印記膜在工作液中孵育5分鐘。從工作液中取出印記膜,并置于一個(gè)塑料片或清潔的塑料紙(膜)中,用一張吸水紙吸除多余的液體,并從印記和塑料紙之間小心地壓出氣泡。

8) 將包在塑料紙(膜)中的印記膜置于膠片暗盒中,蛋白質(zhì)面朝上,除適用于膠片曝光的燈(如紅色安全燈)之外,關(guān)閉所有的燈。

;1)膠片必須在曝光期間保持干燥;2)確保將多余的底物從膜和塑料紙上*去除;3)在整個(gè)膠片處理期間,使用手套。

9) 將X光膠片置于膜的上面。建議次曝光60秒。之后可調(diào)整曝光時(shí)間以達(dá)到結(jié)果?;瘜W(xué)發(fā)光反應(yīng)在底物孵育后的前5-30分鐘期間是強(qiáng)烈的。這一反應(yīng)可以持續(xù)幾個(gè)小時(shí),但強(qiáng)度會(huì)隨時(shí)間下降,如有底物孵育后較長(zhǎng)時(shí)間后曝光,曝光時(shí)間可能需要延長(zhǎng)以獲得較強(qiáng)信號(hào)。如果使用磷光存儲(chǔ)成像設(shè)備(如Bio-Rad的分子成像儀系統(tǒng))或CCD照相機(jī)可能需要較長(zhǎng)的曝光時(shí)間。

    注:膠片與膜之間的任何移動(dòng)可能在膠片上造成人為的非特異信號(hào)。

10)使用合適的顯影劑和定影劑對(duì)膠片進(jìn)行顯影。如果信號(hào)強(qiáng),則縮短曝光時(shí)間或?qū)⒂∮浤みM(jìn)行剝離并降低抗體濃度重新檢測(cè)。

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