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如何避免胎牛血清使用時(shí)出現(xiàn)黑點(diǎn)

更新時(shí)間:2021-06-27      點(diǎn)擊次數(shù):1174
  在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,經(jīng)常加入5%-20%的Gibco胎牛血清,最常使用的Gibco胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細(xì)胞的基因表達(dá)譜,影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中使用10%的Gibco澳洲胎牛血清培養(yǎng)293T細(xì)胞,效果非常好。但是有些細(xì)胞也會(huì)使用5%的Gibco胎牛血清或者20%的Gibco胎牛血清,要根據(jù)具體細(xì)胞選擇合適的Gibco胎牛血清濃度。
  為防止客戶由于操作方面而使黑點(diǎn)生成的辦法。對(duì)此一定要做好以下幾點(diǎn)。方可使細(xì)胞培養(yǎng)順利。
  (1)盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
 ?。?)培養(yǎng)基無(wú)需37℃水浴。
 ?。?)培養(yǎng)基保持PH值7.0-7.2。
 ?。?)嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì),容器定期刷洗。
 ?。?)掌握細(xì)胞傳代的時(shí)機(jī),細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過(guò)老。
  1、化凍將血清從-20度冰箱中取出,室溫(或浸于自來(lái)水中)化凍(約需要30分鐘至2小時(shí),也可放于4度冰箱化凍過(guò)夜;化凍后若不馬上滅活,可以放入4度冰箱中暫時(shí)保存)
  2、滅活
 ?。?)放入室溫的水浴鍋內(nèi)開(kāi)始加熱(同時(shí)放入一個(gè)空的血清瓶,內(nèi)裝100ml自來(lái)水,插入一根溫度計(jì),溫度監(jiān)控以此為準(zhǔn))
 ?。?)當(dāng)溫度計(jì)顯示56度時(shí),停止加熱,改為間斷加熱,維持56度(±0.5度)30分鐘(±3分鐘;若不小心使溫度上升超過(guò)56度,則:若仍未超過(guò)60度,且時(shí)間很短,比如不超過(guò)5分鐘,則仍可使用;若超過(guò)60度,或者時(shí)間較長(zhǎng),則棄去不用,或者嘗試用于一些普通細(xì)胞的培養(yǎng))
  (3)取出,自然冷卻至室溫(約需1-3小時(shí)),可分裝或-20度繼續(xù)凍存。
  3、分裝
 ?。?)轉(zhuǎn)入無(wú)菌間,在超凈臺(tái)內(nèi)將血清分裝入10ml離心管中(注意預(yù)先要將血清輕輕搖動(dòng)數(shù)周、混勻;用吸液管或吹大管吹出血清時(shí)要注意:不要吹出氣泡(血清很粘稠,很容易產(chǎn)生氣泡;如果產(chǎn)生氣泡,則在酒精燈火焰上過(guò)一下))
 ?。?)放入-20度冰箱凍存
 ?。?)全部操作約需要4-6小時(shí)
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