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轉(zhuǎn)染試劑原理及操作方法

更新時(shí)間:2023-06-15      點(diǎn)擊次數(shù):1812
  轉(zhuǎn)染試劑是由它的體外轉(zhuǎn)染試劑加上一些專有的肽配制而成。與傳統(tǒng)的配方相比,這款運(yùn)用了新的化學(xué)試劑,DNA濃縮組被顯著地釋放。主鏈上連上具有屏蔽效應(yīng)的肽,用來防止被體內(nèi)環(huán)境的干擾,獲得高的體內(nèi)轉(zhuǎn)染效率。
 
  轉(zhuǎn)染試劑指真核細(xì)胞由于外源DNA摻入而獲得新的遺傳標(biāo)志的過程。哺乳動(dòng)物的轉(zhuǎn)染技術(shù)在60年代末70年代初即已引入。DNA轉(zhuǎn)染技術(shù)的發(fā)展對現(xiàn)代分子生物學(xué)產(chǎn)生了巨大的影響?;蜣D(zhuǎn)染技術(shù)不僅是研究轉(zhuǎn)基因和基因表達(dá)的重要工具,而且是目前基因治療的關(guān)鍵步驟。理想的基因轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)該具有如下特點(diǎn):1.轉(zhuǎn)染;2.安全;3.低細(xì)胞毒性;4.方法簡單;5.省時(shí)、經(jīng)濟(jì)。
 
  轉(zhuǎn)染試劑工作原理:脂質(zhì)體帶正電,可以靠靜電作用結(jié)合到DNA的磷酸骨架上以及帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面。使用陽離子脂質(zhì)體試劑,DNA并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中,而是帶負(fù)電DNA自動(dòng)結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上,形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物。
 
  轉(zhuǎn)染試劑操作簡單、快速,為操作者節(jié)約大量操作時(shí)間。
 
  1. 以24孔細(xì)胞板轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)為例,推薦一次(即每孔)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的低內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA用量為2µg、轉(zhuǎn)染試劑用量為3~5µl(轉(zhuǎn)染試劑的zui適用量需要根據(jù)不同細(xì)胞和不同培養(yǎng)基來優(yōu)化,但理論上不超出3~5µl范圍)。轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中使用無菌生理鹽水稀釋質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染試劑即可。
 
  2. 為獲得zui高轉(zhuǎn)染效率并盡可能降低細(xì)胞毒性,建議轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在50~80%范圍內(nèi),而且在不影響轉(zhuǎn)染效率的前提下,盡可能減少轉(zhuǎn)染試劑的用量。
 
  3. 本品極大簡化了轉(zhuǎn)染步驟,轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)?;旌虾鬅o需室溫靜置孵育,可直接加入含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染,而且無需在轉(zhuǎn)染后補(bǔ)加血清或更換培養(yǎng)基。
 
  4. 如果實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟诤Y選抗藥性穩(wěn)定細(xì)胞系,可在細(xì)胞傳代后直接進(jìn)行轉(zhuǎn)染試劑實(shí)驗(yàn),從而節(jié)省了18~24小時(shí)的轉(zhuǎn)染前細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間!
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